這在ImageJ里是比較常用的操作,既然兩天了也沒(méi)有人回答,我就嘮叨一下吧。
基本上,沒(méi)有特別要求,怎么照都行,可以疊加。
廣義上,共聚焦圖像的疊加,通常有不同兩種情況:
1,multichannel,雙重或多重?zé)晒鈽?biāo)記,不同通道不同顏色熒光,這種疊加可稱為merge;
2,stack,多層光切片的疊加,一般是Z軸方向,可以有多種算法,這種疊加可稱為project。
當(dāng)然,這兩種情況也可以共同出現(xiàn)(為簡(jiǎn)單見(jiàn)我這里只說(shuō)單純情況),一般這兩種情況的處理方法不同。
我感覺(jué)你是第一種情況。我就按這個(gè)說(shuō)吧:
可以根據(jù)你所使用的共聚焦提供的軟件設(shè)置每個(gè)通道為不同的顏色。其實(shí),本質(zhì)上來(lái)說(shuō)都是偽彩(pseudocolor),就算你用同一種顏色,之后在ImageJ里也可以隨意改變成你期望的兩種顏色。
我通常用leica的機(jī)器,你可能能用別牌子的機(jī)器,這都沒(méi)有關(guān)系。一般機(jī)器輸出的圖片都可以從中分離或者在confocal自帶的軟件里導(dǎo)出成.tiff格式,這個(gè)格式大多軟件都認(rèn),也包括ImageJ。
現(xiàn)在我默認(rèn)你已經(jīng)有了兩個(gè)來(lái)自于同一個(gè)樣品的不同熒光通道的tiff圖片,現(xiàn)在你在imageJ里面依次將它們打開(kāi),現(xiàn)在到ImageJ主界面菜單欄——》Image——》color——》mergechannels選中,會(huì)跳出colormerge對(duì)話框,有幾個(gè)選項(xiàng)我不多講了,按著軟件的默認(rèn)OK就行了。試試吧
另外,如果你是Zeiss的confocal輸出的文件,ImageJ(V1.45)有現(xiàn)成的plugin,操作會(huì)更方便一點(diǎn)。
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